應(yīng)用案例
HPLC-UV柱前衍生法測定17種氨基酸
01 背景介紹 游離氨基酸測定方法主要有柱前衍生反相色譜法、柱后衍生離子交換色譜法、離子色譜-積分脈沖安培檢測法、液相色譜-蒸發(fā)光檢測法、液相色譜-質(zhì)譜法等，其中柱前衍生反相色譜法和柱后衍生離子交換色譜法為氨基酸測定常用方法。因柱后衍生離子交換色譜法大多需要氨基酸分析儀進行檢測，儀器購置成本較高，所以，大多數(shù)情況下，可選擇柱前手動離線衍生后，再采用液相色譜-紫外檢測法進行分離檢測。 上海通微分析技術(shù)有限公司針對氨基酸分離檢測困難的問題，采用通微EasySep?系列液相色譜系統(tǒng)，配合通微UNISIL AA(4.6 mm×250 mm, 5 μm)氨基酸分析柱，采用柱前PITC衍生氨基酸法實現(xiàn)了17種氨基酸的分離檢測。 02 儀器設(shè)備 UNISIL AA(4.6 mm×250 mm, 5 μm)氨基酸分析柱 03 測試結(jié)果 1）衍生反應(yīng)原理：氨基酸與異硫氰酸苯酯（PITC）反應(yīng)，生成有紫外吸收的苯氨基硫甲酰氨基酸衍生物（PTC-氨基酸），PTC-氨基酸經(jīng)反相液相色譜分離后用紫外檢測器檢測。 2）衍生化反應(yīng)步驟：精密量取氨基酸試樣溶液200μl，置離心管中，精密加入1mol/L三乙胺乙腈溶液100μl，混勻，精密加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液100μl，混勻，密封，放置1小時，加正己烷0.8ml，充分振搖20～30秒，靜置分層，精密量取下層溶液2μl，注入液相色譜系統(tǒng)分析。 色譜圖舉例 17種氨基酸分離檢測色譜圖 1.天門冬氨酸 2.谷氨酸. 3.絲氨酸. 4.甘氨酸. 5.組氨酸. 6. 精氨酸. 7.蘇氨酸. 8.丙氨酸. 9.脯氨酸. 10.酪氨酸. 11.纈氨酸. 12.甲硫氨酸. 13. 異亮氨酸. 14.亮氨酸. 15.苯丙氨酸. 16. 色氨酸. 17.賴氨酸. 3）注意事項：因胱氨酸或半胱氨酸PITC衍生產(chǎn)物不穩(wěn)定，所以胱氨酸或半胱氨酸無法定量；因色氨酸與鳥氨酸的PITC衍生產(chǎn)物分離困難，所以不適合同時含有色氨酸和鳥氨酸樣品的含量測定。 04 結(jié)論 采用通微EasySep ?系列液相色譜系統(tǒng)，配置UV檢測器，配備UNISIL AA(4.6 mm×250 mm, 5 μm)氨基酸分析柱，可以實現(xiàn)混合氨基酸的分離檢測。 05 配置列表 Unimicro ChromStation色譜工作站 通微公司，于2002年成立于上海張江高科技園區(qū)，在國內(nèi)擁有3家全資子公司，集分析儀器研發(fā)、制造、銷售與服務(wù)為一體，在新型液相色譜儀器及檢測器，特別是微流電動液相色譜相關(guān)領(lǐng)域取得了眾多重大開創(chuàng)性成果?？蔀槟峁┌ㄎ⒘麟妱右合嗌V系統(tǒng)、毛細管電泳儀、液相色譜儀、蒸發(fā)光散射檢測器、微型質(zhì)譜儀和液相色譜柱在內(nèi)的多種產(chǎn)品及服務(wù)。 技術(shù)電話：021-50801569 銷售電話：021-38953588
推薦儀器配置 EasySep ?-3030液相色譜系統(tǒng)，配備UV檢測器 UNISIL AA(4.6mm×250mm, 5μm)氨基酸分析柱