應(yīng)用案例
毛細(xì)管凝膠電泳CGE-UV用于分析核酸樣品
毛細(xì)管凝膠電泳CGE-UV用于分析核酸樣品
1. 背景介紹
一種可以通過(guò)長(zhǎng)度測(cè)量核酸分子完整性的高分辨率分析方法對(duì)于質(zhì)量保證、了解藥效和優(yōu)化生產(chǎn)工藝至關(guān)重要。毛細(xì)管電泳（CE）系統(tǒng)，如核酸片段分析儀，可用于分析各種核酸樣品，包括線性化質(zhì)粒DNA和體外轉(zhuǎn)錄RNA等。相比之下，毛細(xì)管凝膠電泳（CGE）涉及用分離凝膠（熒光染料基質(zhì)）填充毛細(xì)管，比傳統(tǒng)瓊脂糖及聚丙烯酰胺PAGE膠電泳繁瑣的染色步驟更加環(huán)保易于操作，大大提升了分析效率。采用電壓進(jìn)樣在毛細(xì)管上進(jìn)行微升級(jí)的進(jìn)樣，并使用電泳分離使RNA/DNA片段（結(jié)合熒光染料）按大小遷移通過(guò)毛細(xì)管。對(duì)具有確定大小的RNA/DNA片段的參考條帶樣本進(jìn)行大小比較。本應(yīng)用案例中部分實(shí)驗(yàn)參照《美國(guó)藥典》中mRNA疫苗質(zhì)量控制分析方法進(jìn)行，分別對(duì)小核酸、DNA片段進(jìn)行了有效的分離。
2. 測(cè)試條件
儀器： | CE-1000毛細(xì)管電泳儀 | ||
波長(zhǎng): | 280nm/254nm | ||
毛細(xì)管內(nèi)徑： | 75um/50um | 有效長(zhǎng)度： | 775px（總長(zhǎng)1450px） |
樣品： | 1.????? 人工合成的5種小核酸混合樣（3000-30000Da） 2.????? 市售QDL 2,000 ?Quantitative DNA Marker | ||
運(yùn)行電壓： | 10kV/20kV | ||
進(jìn)樣電壓： | 10kV | 進(jìn)樣時(shí)間： | 10s |
分離電解質(zhì)： | CE凝膠(用于RNA和DNA的分析) | ||
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3. 測(cè)試結(jié)果
1) 客戶(hù)提供的5種人工合成小RNA（分子量：3000-30000Da）混合樣的毛細(xì)管凝膠電泳分析
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圖1. 五個(gè)小RNA的毛細(xì)管凝膠電泳紫外吸收?qǐng)D
2) QDL 2,000 Quantitative DNA Marker的毛細(xì)管凝膠電泳分析
QDL2,000 Quantitative DNAMarker濃度約460 ng/5μL,適用于不同濃度DNA片段的相對(duì)定量。本制品為已含有1×Orange G Loading的DNA溶液。Orange G色素的遷移速度和25 bp的雙鏈線型DNA相近 (3% TAE電泳時(shí))。該Marker由DNA片段2,000 bp、1,000 bp、750 bp、500 bp、250 bp以及100 bp組成，5μL電泳時(shí)每條帶DNA量分別為200 ng、100 ng、75 ng、50 ng、25 ng及10 ng。
圖2. QDL2,000Quantitative DNA Marker的毛細(xì)管凝膠電泳紫外吸收?qǐng)D
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4. 結(jié)論
使用通微CE-1000毛細(xì)管電泳系統(tǒng)，配備紫外檢測(cè)器，可以分別用不同的CE凝膠實(shí)現(xiàn)客戶(hù)提供的5種人工合成小RNA片段（3000-30000Da）的分離以及市售的100-2000bp的QDL2,000 Quantitative DNA Marker分離分析。該方法精確、靈敏度高，能滿(mǎn)足日常分析檢測(cè)的要求。同時(shí)，RNA/DNA標(biāo)記物可以提供片段長(zhǎng)度。此外，激光誘導(dǎo)熒光可以提供更高的分辨率，您也可以從上海通微訂購(gòu)激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器。
5. 配制列表
推薦儀器配制 | CE-1000毛細(xì)管電泳系統(tǒng) (標(biāo)配高壓電源和UV檢測(cè)器, 選配激發(fā)波長(zhǎng)488nm/發(fā)射波長(zhǎng)525nm的LIF檢測(cè)器) |
TSI毛細(xì)管燒結(jié)器 | |
Unimicro ?ChromStation 色譜工作站 |
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